為什麼要進行蛋白質純化?

蛋白質純化在生物化學領域中極具研究價值！研究專家能透過純化的目標蛋白質來分析蛋白質結構、觀測酶的活性、剖析基因問題，以及研究細菌細胞的抗體用以製作抗生素等。^[1]

 

可用於蛋白質純化的生物緩衝劑推薦

在不干擾蛋白質活性的前提下，觀測目標的種類與使用的純化方式，都會影響緩衝劑的選擇。因此在進行蛋白質純化前，要先確定純化的方式、欲測定的細胞樣本，以及您想要得到的最終結果，再依據上述變項來判定並採用合適的緩衝劑。^[2][3].以下為您推薦6種常用於蛋白質純化的生物緩衝劑：

 

1) BIS-TRIS

CAS No.: 6976-37-0
適用pH值： 5.8 - 7.2

應用內容：

◆可用於各種類型的電泳

◆與ACES緩衝劑一起作為膠體電泳（BIS-TRIS / ACES）的跑膠緩衝液。

◆研究報告指出BIS-TRIS也能用於陰離子交換層析法、核磁共振光譜儀(nuclear magnetic resonance spectroscopy, NMR)以及X光晶體學(X-ray crystallography)中。

◆被認為是高毒性緩沖劑：二甲基胂酸(Cacodylate)的絕佳替代品。

◆它不適用於蛋白質定量分析（bicinchoninic acid, BCA）。

◆它會與人類肝臟的脂肪酸結合蛋白（fatty-acid-binding, FAB）產生相互作用並干擾蛋白質動力學。

了解更多關於Hopax BIS-TRIS

Further reading:The uses of Bis-Tris Buffer - A starting guide

 

2) MOPS

CAS No.: 1132-61-2
適用pH值： 6.5 - 7.9

應用內容：

◆可應用於層析法

◆它會與牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin, BSA）的肽主鏈相互作用，影響蛋白質的穩定性

了解更多關於Hopax MOPS

Further reading:為什麼使用MOPS？

 

3) PIPES

CAS No.: 5625-37-6
適用pH值： 6.1 - 7.5

應用內容：

◆可應用於層析法

◆與MES緩衝劑和MOPS緩衝劑相似，這種緩衝劑缺乏與大多數金屬離子形成螯合物的能力，可在金屬離子溶液中作為非配位緩衝劑。

了解更多關於Hopax PIPES

Further reading:為什麼使用 PIPES Buffer

 

4) TES

CAS No.: 7365-44-8
適用pH值： 6.8 - 8.2

應用內容：

◆作為酶測定緩衝液。

◆可應用於凝膠過濾與親和層析。

了解更多關於Hopax TES

 

5) TRIS

CAS No.: 77-86-1
適用pH值： 7.2 - 9.0

應用內容：

◆可應用於離子交換法。

◆通常用於製備Laemmli緩衝液，用於十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)中蛋白質樣本的變性和上樣

◆它可能會干擾布拉德福蛋白質定量法（Bradford protein assay）

‧◆不適用於蛋白質定量分析（bicinchoninic acid, BCA）。

了解更多關於Hopax TRIS

Further reading:The uses of Tris buffer - A starting guide

 

6) TRIS-HCL

CAS No.: 1185-53-1
適用pH值： 7.2 - 9.0

應用內容：

◆可應用於鹽析法中的分離與透析溶液

◆可應用於離子交換法中的上樣

◆可應用於親合層析法中的底物溶液

◆用於十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)中的洗滌劑

了解更多關於Hopax TRIS-HCL

 

HOPAX是專業的生物緩衝劑製造商，我們生產30多種高品質的生物緩衝劑，並提供多種包裝選項，以及親切且完善的客戶服務。若有相關產品需求請聯繫我們，讓我們給您最佳建議！

 

參考文獻：

¹ Studying Proteins and Protein Purification

² Protein Lysate TLC: Pro-Tips to Keep Your Protein Extracts in (Experimentally) Perfect Shape.

³ How to choose the perfect buffer to get a pure, stabilised, functional protein

⁴ Purification and biochemical characterization of a novel thermostable serine alkaline protease from Aeribacillus pallidus C10: a potential additive for detergents Vildan Yildirim, a Mustafa Ozkan Baltaci, a Ilknur Ozgencli, b Melda Sisecioglu, a Ahmet Adiguzel, a and Gulsah Adiguzel c

⁵ Native RNA purification by gel filtration chromatography.

⁶ Protein Stability, M. Michael Gromiha, in Protein Bioinformatics, 2010