蛋白質純化的4種方式與注意事項

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簡介蛋白質純化的四種方式

蛋白質純化研究行之有年，發展至今已有200多年歷史。科學家從最簡單的沉澱程序開始，在歷經 各方翹楚的努力、技術不斷改進下，現已有諸多方式可以進行蛋白質純化研究〔1〕，且相關技術在各 領域的應用也日趨成熟。目前在生物化學領域中，研究專家主要以鹽析法、膠體過濾法、離子交換 法、親和層析法四種方式來進行蛋白質純化〔2〕以下為您簡單介紹這四種方式及其特色。

 

蛋白質純化技術
鹽析法(疏水作用)
膠體過濾法
膠體過濾法
親和層析法

應用原理

透過將蛋白質加入高鹽緩衝液，降低蛋白質溶解度，從而將所需物質從中分離提取。

利用分子大小通過吸收性材料篩選掉大分子，從而將所需物質從中分離提取。

根據離子和極性分子對離子交換劑的親和力將所需物質從中分離提取。

利用對所要提取之分子有高度親和性的物質將其吸附且排除雜質後從中分離提取

應用範圍

生物分離工程〔3〕

監測主要性質包含粒徑和分子量〔4〕

分析核酸、胺基酸〔5〕

酶與底物，受體與配體或抗體與抗原之間的相互作用〔6〕

建議使用之緩衝劑

 

◆TES

◆TRIS-HCL

 

 

◆TES

◆TRIS

◆TES

◆TRIS-HCL

◆BIS-TRIS

 

 

◆TRIS

◆TRIS-HCL

◆BIS-TRIS

 

 

◆TES

◆MOPS

◆PIPES

◆TRIS-HCL

 

*表格1：蛋白質純化的四種方式及其簡介〔2〕

 

蛋白質純化研究過程中應該注意什麼?

在蛋白質純化研究過程中首重溫度控制、pH值與緩衝劑的選擇等參數。欲進行蛋白質純化，須先將細胞裂解，但細胞裂解後，會致使蛋白質樣本變得脆弱，此時若將樣本置於高溫或是極端低溫環境都會使其產生變性進而喪失活性。因此應在適宜的溫度環境中處理樣本〔7〕，以免影響實驗結果。

 

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Further reading：

/6 biological buffers recommended for protein purification

參考資料

[1]Protein Lysate TLC: Pro-Tips to Keep Your Protein Extracts in (Experimentally) Perfect Shape.

[2]Protein Purification. Biologics International Corp

[3]Methodology for predicting the separation of proteins by hydrophobic interaction chromatography and its application to a cell extract.

[4]Application of Size Exclusion Chromatography in the Development and Characterization of Nanoparticulate Drug Delivery Systems. Daniel P. Otto,Hermanus C. M. Vosloo &Melgardt M. de Villiers

[5]Application of Size Exclusion Chromatography in the Development and Characterization of Nanoparticulate Drug Delivery Systems. Daniel P. Otto,Hermanus C. M. Vosloo &Melgardt M. de Villiers

[6]Methodology for predicting the separation of proteins by hydrophobic interaction chromatography and its application to a cell extract.

[7]Protein Lysate TLC: Pro-Tips to Keep Your Protein Extracts in (Experimentally) Perfect Shape.

發佈日期：2020.04.23

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