タンパク質精製の4つの方法と注意点

タンパク質精製の 4 つの方法の紹介
タンパク質精製研究は古くからあり、200 年以上の歴史があります。 科学者は最も単純な沈殿手順から始め、すべてのリーダーの努力と技術の継続的な改善の後、タンパク質精製研究を実行する多くの方法があり [1]、さまざまな分野での関連技術の応用もますます進んでいます。 より成熟した。 現在、生化学の分野では、主に塩析法、コロイドろ過法、イオン交換法、アフィニティークロマトグラフィーを用いてタンパク質を精製しています[2]。以下、これら4つの方法とその特徴を簡単に紹介します。
タンパク質精製技術
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塩析法(疎水的相互作用)
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コロイドろ過
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コロイドろ過
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アフィニティークロマトグラフィー
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適用原則 |
タンパク質を高塩緩衝液に添加してタンパク質の溶解度を低下させることにより、目的の物質を分離および抽出します。 |
分子サイズを使用して、吸収性材料を介して高分子をろ過し、そこから目的の物質を分離して抽出します。 |
イオン交換体に対するイオンと極性分子の親和性により、目的の物質を分離・抽出します。 |
抽出する分子と親和性の高い物質を用いて吸着させ、不純物を除去した後、分離抽出します。 |
適用範囲 |
生物分離工学 [3] |
粒子サイズや分子量などの重要な特性を監視 [4] |
核酸とアミノ酸の分析 [5] |
酵素と基質、受容体とリガンド、または抗体と抗原の間の相互作用 [6] |
推奨バッファー |
◆TES
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◆TES ◆TRIS ◆TES
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◆TRIS
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◆TES ◆MOPS
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*表 1: タンパク質精製の 4 つの方法とその紹介 [2]
タンパク質精製研究で注意すべきことは何ですか?
温度制御、pH 値、バッファーの選択などのパラメーターは、タンパク質精製研究の最初のステップです。 タンパク質の精製にはまず細胞を溶解する必要がありますが、細胞溶解後のタンパク質サンプルはもろくなり、サンプルを高温または極低温環境に置くと変性して活性を失います。 したがって、実験結果に影響を与えないように、サンプルは適切な温度環境で取り扱う必要があります [7]。
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Further reading:
/6 biological buffers recommended for protein purificationReferences
[1]Protein Lysate TLC: Pro-Tips to Keep Your Protein Extracts in (Experimentally) Perfect Shape.
[2]Protein Purification. Biologics International Corp
[3]Methodology for predicting the separation of proteins by hydrophobic interaction chromatography and its application to a cell extract.
[4]Application of Size Exclusion Chromatography in the Development and Characterization of Nanoparticulate Drug Delivery Systems. Daniel P. Otto,Hermanus C. M. Vosloo &Melgardt M. de Villiers
[5]Application of Size Exclusion Chromatography in the Development and Characterization of Nanoparticulate Drug Delivery Systems. Daniel P. Otto,Hermanus C. M. Vosloo &Melgardt M. de Villiers
[6]Methodology for predicting the separation of proteins by hydrophobic interaction chromatography and its application to a cell extract.
[7]Protein Lysate TLC: Pro-Tips to Keep Your Protein Extracts in (Experimentally) Perfect Shape.