BIS-TRIS

基本資訊:

• CAS No.: 6976-37-0
• 有效的pH範圍: 5.8 – 7.2

BIS-TRIS的應用:

• 用於AAV8血友病B基因治療載體純度和基因組完整性之分析與生物效能測定中，作為凝膠電泳分析步驟中的分離膠體。^[2]

HEPES

基本資訊:

• CAS No.: 15471-17-7
• 有效的pH範圍: 6.8 – 8.2

HEPES的應用:

• 用於AAV載體生產與純化之HEK293T細胞裂解步驟，加入酸性裂解液中，用以中和pH值。^[1]
• 用於AAV載體生產的HEK293T細胞培養步驟中，作為培養基之緩衝液，用以維持培養基之pH值，實驗結果顯示其提升了病毒質粒的釋放並提高病毒產量。^[1]

若您有特殊細胞株培養需求，我們亦提供通過細胞毒性測試之細胞培養級HEPES

延伸閱讀:為什麼使用HEPES緩衝劑?

TRIS

基本資訊:

• CAS No.: 77-86-1
• 有效的pH範圍: 7.2 – 9.0

TRIS的應用:

• 於慢病毒載體純化的過程中，由於常見的PBS在較低溫度下缺乏緩衝能力且其與Benzonase步驟具不相容性，故TRIS是此處作為洗滌劑的最佳選擇。除此之外，TRIS亦可避免病毒與AEXc基質結合的任何pH限制。^[3]
• 在純化病毒顆粒的過程中，使用透過病毒顆粒生產過程中收穫的細胞重懸於裂解緩衝液（50 mM Tris，150 mM NaCl，2 mM MgCl2，pH 7.5）中。再透過三個凍融循環將病毒顆粒從細胞中釋出。^[5]

TRIS-HCL

基本資訊:

• CAS No.: 1185-53-1
• 有效的pH範圍: 7.2 – 9.0

TRIS-HCL的應用:

• 用於AAV8血友病B基因治療載體純度和基因組完整性之分析與生物效能測定中，作為凝膠電泳分析步驟中的分離膠體。^[2]

延伸閱讀:腺相關病毒 (Adeno-associated viruses, AAV)載體的製備要點

CHAPS

基本資訊:

• CAS No.: 75621-03-3

CHAPS的應用:

• 用於蛋白質組學：哺乳動物細胞和組織分析之TMT樣品製備，使用CHAPS裂解緩衝液，可避免蛋白質消化過程中蛋白質意外降解，提高蛋白質提取效率。^[4]
• 先於37度C下與Benzonase核酸酶一起孵育，可裂解剩餘的DNA汙染物，再加入CHAPS (0.5% w/v)，透過離心（3000g，10分鐘）從細胞碎片中清除粗裂解物。^[5]
• CHAPS已成功用於溶解內在膜蛋白和受體，並具備維持蛋白質活性的能力。^[6]
• 在CHAPS存在的情況下可以對蛋白質進行碘化。^[6]

延伸閱讀: 什麼是基因治療?

延伸閱讀: 基因治療中最常見的四種病毒載體

延伸閱讀:為什麼要使用CHAPS

參考資料:

^[1] Production of adeno-associated virus vectors for in vitro and in vivo applications: https://www.nature.com/articles/s41598-019-49624-w

^[2] Development of an In Vitro Biopotency Assay for an AAV8 Hemophilia B Gene Therapy Vector Suitable for Clinical Product Release: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2329050120300437

^[3] Downstream Processing of Lentiviral Vectors: Releasing Bottlenecks https://www.liebertpub.com/doi/pdf/10.1089/hgtb.2012.059

^[4] TMT Sample Preparation for Proteomics Facility Submission and Subsequent Data Analysis: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7442215/

^[5] ijms-20-05702.pdf

^[6] Method for the production and purification of adenoviral vectors: https://patents.google.com/patent/US7732129B1/en