細胞療法で使用される生物学的緩衝液
細胞療法では、培養のために細胞を分離するために生物学的緩衝液が使用されることがあります。 以下は、細胞療法で使用される生物学的緩衝液です。
参考資料: The application of Cell Therapy
TRIS-HCl:
- パーキンソン病の場合、ウェスタン分析による分化細胞中のチロシンヒドロキシラーゼの検出に使用: 次にメンブレンを 10% BLOTTO (TBST [50 mM Tris- HCl pH 7.5、150 mM NaCl、0.1% Triton X-100])。 [1]
- エステルブロット分析に使用: 脳組織と共培養細胞を氷冷溶解バッファー (20 mM Tris-HCl、pH 7.5、1 mM EDTA、5 mM MgCl2、1 mM ジチオトレトール、0.1 mM フッ化フェニルメチルスルホニルとプロテアーゼ阻害剤) に溶解しました。 カクテル. ライセートは遠心分離されました. [2]
- 蛍光標識された FCS の調製: 次に、サンプルを 5 ml の DMSO に溶解した 0.5 g の FITC に加えました。 10 分間激しく振とうした後、反応液を 4°C で 16 時間インキュベートし、0.1 倍量の 1 M Tris-HCl 緩衝液 (pH 8.0) を加えて反応を停止しました [3]。
- 腫瘍免疫療法の場合: 塩化マンガン (MnCl2) 溶液を最初に OVA 溶液に加え、攪拌しながら 20 分間インキュベートしました。 DAP溶液を上記の溶液に滴下し、混合物のpHをトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン-塩化水素(Tris-HCl)緩衝液でpH 7.8～8に調整した[4]。
- 肝癌細胞の処理に使用: 人工基質の酵素アッセイ 50 mM Tris-HCl (pH 7.5)]、基質として 20 μM MOAc-Pro-Leu-Gly-Leu-A2pr(Dnp)-Ala-Arg-NH2 を使用 (25 °C で 90 分間のインキュベーション) [5]。
- パーキンソニズムのアプリケーションでは、PVDF メンブレンをバッファー (0.05% Triton および 0.9% NaCl を含む 50 mM Tris-HCl、pH 7.3) で洗浄し、ブロッキング溶液に 60 分間浸した後、二次抗体と室温で 1 分間反応させました。 [6]
- 抗原標的がん免疫療法、組換え大型HSPおよび腫瘍タンパク質抗原の調製に、溶解緩衝液、結合緩衝液、洗浄緩衝液および溶出緩衝液中で使用されます。 [7]
TRIS:
- 対応する細胞との相互作用における骨髄間葉系幹細胞 (BM-MSC) および NPC 由来のエクソソームの役割を検出するために使用されます。 2 種類の細胞に由来する BM-MSC、NPC、およびエクソソームを、50 mM Tris (pH 7.4)、1% Triton X-100、150 mM NaCl、1% デオキシコール酸ナトリウム、0.1% SDS を含む RIPA (Beyotime Biotechnology) を使用して溶解しました。 、EDTA、オルトバナジン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、ロイペプチン、1 mM PMSF.[8]
- 心臓細胞療法のための幹細胞 DNA の完全性の評価、細胞溶解バッファーの場合、100 mL の溶解バッファー (2.5 M NaCl、0.1 M EDTA、10 mM Tris、1% Triton X-100) を脱イオン水 (DIH2O) に溶解します。 次に、10 M NaOH を加えて pH を 10.0 に調整します。 バッファーを 4 °C に冷却します [9]。
CHAPS:
- HLA リガンドの分離に使用されます。 HLA クラス I 分子は、標準的な免疫親和性精製を使用して分離されました。 急速冷凍された GSC ペレットまたは急速冷凍された原発性神経膠芽腫組織サンプルは、1 × プロテアーゼ阻害剤を含む 10 mM CHAPS/PBS で溶解されました。 [10]
- 強力なアポIDO1阻害剤のがん免疫療法。 組換え IDO1 活性アッセイ 25°C または 37°C での組換え IDO1 活性は、前述のように測定されました。 DMSO 担体 (0.5 μl DMSO 容量) 中の阻害剤に (25 μl) を添加し、指定された時間と温度 (さまざま) でインキュベートしました [11]。
Reference:
[1]https://stemcellsjournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1634/stemcells.2008-0074
[2]https://doi.org/10.1111/j.1471-4159.2008.05589.x
[3]https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1525001604000772
[4]https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acsnano.9b05974
[5]https://faseb.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1096/fj.04-2126com
[6]https://stemcellsjournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1634/stemcells.2005-0053
[7]https://link.springer.com/protocol/10.1007%2F978-1-4939-7477-1_25
[8]https://link.springer.com/article/10.1186/s13287-017-0563-9
[9]https://www.jove.com/t/58971/assessing-stem-cell-dna-integrity-for-cardiac-cell-therapy
[10]https://link.springer.com/article/10.1007/s00401-018-1836-9
[11]https://www.authorea.com/doi/full/10.22541/au.159863181.10139431
