培地/緩衝液の濃度、および細胞への毒性。

生細胞培養では、pH の乱れは代謝の避けられない結果であり、培地が酸性化する一般的な傾向があり、その程度は培地の緩衝能力の関数でもあります。

培地への HEPES の添加の主な開始点は、細胞環境を最適な pH に維持することです。 これは、インキュベーターの外で細胞を扱うことに多くの時間を費やしている場合は特に非常に重要です。

重炭酸ナトリウムは、培地の pH を安定させるために使用される別のバッファーであることに注意してください。 ただし、HEPES (細胞培養グレード) は重炭酸ナトリウムの代わりに使用しないでください。培地は予想よりも酸性になります。 その理由は、通常の重炭酸緩衝液が CO2 依存性であるのに対し、HEPES (細胞培養グレード) は CO2 非依存性であるためです。 これが、培地をインキュベーター内ではなく室内の空気中にそのままにしておくと、培地中のフェノールレッド (pH インジケーター) が時間の経過とともに色が変わる理由です。

考慮すべき重要な質問の 1 つは、どのタイプの初代細胞を培養しているのかということです。 一部の初代細胞 (線維芽細胞) は培養が非常に簡単で、培地に多くの添加剤を必要としませんが、他の細胞 (例えば T 細胞) は非常に選り好みが強く、高度な緩衝および添加条件を必要とします。

細胞培養培地中の HEPES の推奨最終作業濃度は、通常 10mM から 25mM の範囲でした。 高濃度は、長い潜伏期間の下で細胞に毒性をもたらす可能性があります。

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